Розробка непрямого методу ІФА для виявлення антитіл IgG до коронавірусу синдрому гострої діареї свиней на основі рекомбінантного спайкового білка

Коронавірус синдрому гострої діареї свиней (SADS-CoV) — це нещодавно виявлений кишково-патогенний коронавірус свиней, який може викликати водянисту діарею у новонароджених поросят і завдати значних економічних збитків свинарству.На даний момент не існує відповідного серологічного методу для оцінки ефективності інфекції та вакцини SADS-CoV, тому існує нагальна потреба у використанні ефективного імуноферментного аналізу (ELISA), щоб компенсувати цей недолік.Тут була сконструйована рекомбінантна плазміда, що експресує спайк-білок SADS-CoV (S), злитий з Fc-доменом IgG людини, для отримання рекомбінантного бакуловірусу та експресії в клітинах HEK 293F.Білок S-Fc очищається смолою протеїну G і зберігає реакційну здатність з антитілами проти Fc людини та антитіл проти SADS-CoV.Потім білок S-Fc використовували для розробки непрямого ELISA (S-iELISA) та оптимізації умов реакції S-iELISA.У результаті, аналізуючи значення OD450nm 40 негативних сироваток на SADS-CoV, підтверджених імунофлуоресцентним аналізом (IFA) і вестерн-блоттингом, було визначено, що порогове значення становить 0,3711.Коефіцієнт варіації (CV) 6 сироваток, позитивних на SADS-CoV, у межах і між сеансами S-iELISA становив менше 10%.Тест на перехресну реактивність показав, що S-iELISA не має перехресної реактивності з іншими сироватками вірусу свиней.Крім того, на основі виявлення 111 клінічних зразків сироватки, загальний рівень збігу ІФА та S-iELISA склав 97,3%.Тест нейтралізації вірусу з 7 різними значеннями OD450nm сироватки показав, що значення OD450nm, виявлене S-iELISA, позитивно корелює з тестом нейтралізації вірусу.Нарешті, S-iELISA було проведено на 300 зразках сироватки свиноферми.Комерційні набори інших свинячих ентеровірусів показали, що позитивні показники IgG для SADS-CoV, TGEV, PDCoV і PEDV становили 81,7%, 54% і 65,3% відповідно., 6% відповідно.Результати показують, що S-iELISA є специфічним, чутливим і відтворюваним, і його можна використовувати для виявлення інфекції SADS-CoV у свинарстві.Ця стаття захищена авторським правом.всі права захищені.